Ultrafiltración: Elución rápida y fácil de proteínas de geles de poliacrilamida
La ultrafiltración es una técnica que se basa en la separación de membranas que se ha aplicado a la separación de micromoléculas disueltas. Cuando se aplica una fuerza, como la fuerza centrífuga, a esas moléculas que tienen un tamaño inferior al de los poros de la membrana pasarán a través de ella y las moléculas más grandes quedarán retenidas.
Los dispositivos de centrifugación Nanosep™ se han diseñado para la aplicación de esta técnica en la manipulación tanto de proteínas como de ADN. Están equipados con membranas preparadas especialmente que tienen cortes de peso molecular (MWCO) diferentes. La selección del MWCO correcto (consulte la tabla 1) permite obtener una concentración eficiente de las soluciones de proteínas y también la eliminación de sales, el intercambio de tampones y el fraccionamiento de proteínas rápido y eficiente. Así, estos dispositivos ofrecen una alternativa rápida y económica a los métodos usados frecuentemente para la elución y la concentración de proteínas que se han separado en geles de poliacrilamida y, dada su naturaleza suave, este método de elución es especialmente eficaz para las preparaciones de complejos de proteínas y moléculas bioactivas.
"La cantidad de gel de poliacrilamida inicial es el factor limitante del elevado nivel de recuperación de proteínas."
La reducción de la cantidad de poliacrilamida no solo aumenta el rendimiento de la proteína eluida, sino que además reduce considerablemente el tiempo de centrifugación cuando se eluyen proteínas bioactivas. Este método se ha aplicado con éxito a la elución de mezclas de proteínas enzimáticamente activas en su estado natural, bajo condiciones de desnaturalización y sin desnaturalización, sin pérdida de actividad considerable. La cantidad de dodecilsulfato sódico (SDS) en el tampón de elución puede determinarse empíricamente para aumentar la recuperación al tiempo que se mantiene la actividad biológica. Por lo tanto, la ultrafiltración es un método rápido y suave que resulta ideal para la elución de proteínas bioactivas (figura 1).
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