Invitrogen™ Bac-to-Bac™ N-His TOPO™ Expression System

Descripción

La expresión de baculovirus Bac-to-Bac™ es un método eficaz para producir baculovirus para la expresión de proteínas de alto nivel en células de insectos. Se basa en la generación de virus recombinante por la transposición específica de sitio en E. coli en lugar de una recombinación homóloga en células de insectos. Nuevo: vectores pFastBacTOPO™


Expresión de proteínas fiable y rápida
El sistema de expresión de baculovirus Bac-to-Bac™ es más rápido y fácil que la expresión de baculovirus tradicional, y mantiene altos niveles de expresión de proteínas. Bac-to-Bac™ se basa en la generación de baculovirus recombinante mediante la transposición específica de sitio en E. coli en lugar de una recombinación homóloga en células de insectos. El sistema de expresión de baculovirus Bac-to-Bac™ es un sistema muy valorado en la literatura académica. Aproximadamente 100 citas anuales desde el año 2000

Los sistemas tradicionales de baculovirus requieren la purificación y amplificación de un sobrenadante viral inicial de bajo título. Esto necesita un análisis de placa, que requiere mucho tiempo. Sin embargo, el vector Bac-to-Bac™ pFastBac™ se recombina con el bacmid precursor en células competentes de E. coli DH10Bac™ para formar un bacmid de expresión. Transfecta el bacmid en células de insectos para la producción rápida de un alto título de partículas de baculovirus recombinantes puros en la primera transfección. Ahorrará varias semanas de su valioso tiempo. Obtenga un stock de baculovirus P2 puro el día 10 sin necesidad de llevar a cabo un tedioso ensayo de placas (consulte la figura 1)

Alta expresión, detección fácil
pFastBac™ utiliza el promotor de poliedrina fuerte para generar altos niveles de expresión en una variedad de líneas celulares de insectos como Sf9, Sf21, y células High Five™.

Nuevas adiciones:
Los vectores Bac-to-Bac™ pFastBac también están disponibles como vectores pFastBacTOPO™. Los vectores pFastBacTOPO™ son vectores Blunt™ TOPO™ y se suministran con E. coli Mach1™-T1R E. para facilitar la clonación y la propagación pFastBac⁄GOI. Los nuevos vectores le permiten:

Amplifique su gen de interés (GOI) con una enzima de PCR de alta fidelidad como Accuprime™ Pfx SuperMix.

Clone con TOPO™ el producto de PCR de extremo romo en el nuevo vector en solo cinco minutos.

Visualice las colonias ocho horas después de colocarlas en placas selectivas de ampicilina, ya que las células de E. coli Mach1™-T1R tienen un tiempo de duplicación más rápido comparado con otras cepas de clonación estándar.

Con el kit de clonación o expresión Bac-to-Bac™ N-His TOPO™, puede producir una proteína de fusión de His con extremo N-terminal con un sitio de escisión TEV para purificar con resina quelante de níquel (sistema de purificación Invitrogen ProBond™) y generar una proteína nativa con la ayuda de la popular proteasa AcTEV™ de Invitrogen.

Los nuevos vectores combinan la tecnología de clonación TOPO™ con las características de expresión de baculovirus Bac-to-Bac™ altamente reconocidas para permitir la clonación fácil y la expresión de proteínas de alto nivel.
Los vectores pFastBacTOPO™ se ofrecen como kits de clonación y expresión.