Molecular Probes™ BODIPY™ 576/589 NHS Ester (Succinimidyl Ester)

Descripción

El tinte BODIPY™ 576/589 es un tinte fluorescente rojo brillante con una excitación y emisión similares al tinte Alexa Fluor™568 o Rhodamine Red™. Tiene un alto coeficiente de extinción y rendimiento cuántico de fluorescencia y es relativamente insensible a la polaridad de los disolventes y al cambio de pH. A diferencia de los fluoróforos altamente solubles en agua de los colorantes Alexa Fluor™ 488 y la fluoresceína (FITC), los colorantes BODIPY™ tienen propiedades hidrofóbicas únicas ideales para la tinción de lípidos, membranas y otros compuestos lipofílicos. El colorante BODIPY™ 576/589 tiene una vida útil de estado excitado relativamente larga (normalmente 5 nanosegundos o más), lo cual es útil para ensayos basados en la polarización de fluorescencia y una sección transversal de dos fotones grande para la excitación multifotónica. Además de formulaciones de colorante reactivo, ofrecemos el colorante BODIPY™ 576/589 conjugado con una serie de anticuerpos, péptidos, proteínas, trazadores y sustratos de amplificación optimizados para la detección y el marcaje celular.

El éster NHS (o succinimidilo éster) de BODIPY™ 576/589 es la herramienta más popular para conjugar el colorante con una proteína o anticuerpo. Los ésteres NHS se pueden usar para etiquetar aminas primarias (R-NH₂) de proteínas, oligonucleótidos modificados por aminas y otras moléculas que contengan aminas. Los conjugados BODIPY™ 576/589 resultantes presentan una fluorescencia brillante, unos anchos de banda de emisión estrechos y una vida útil de estado excitado relativamente larga, que puede ser útil para ensayos de polarización de fluorescencia y microscopia de excitación de dos fotones (TPE).

Este colorante reactivo contiene un espaciador de alquilo C₃ entre el fluoróforo y el grupo de ésteres NHS. Este espaciador ayuda a separar el fluoróforo de su punto de fijación, reduciendo potencialmente la interacción del fluoróforo con la biomolécula a la que se conjuga.

Información detallada sobre este éster NHS BODIPY™ 576/589:

Etiqueta de fluoróforo: Colorante BODIPY™ 576/589
Grupo reactivo: Éster de NHS (succinimidilo éster)
Reactividad: Aminas primarias en proteínas y ligandos, oligonucleótidos modificados con aminas
Ex/Em del conjugado: 575/588 nm
Coeficiente de extinción: 83.000 cm-1 m-1
Peso molecular: 426,19

Reacción de conjugación típica
Los reactivos de amina se pueden conjugar con prácticamente cualquier proteína o péptido (el protocolo proporcionado está optimizado para anticuerpos IgG). La reacción se puede ampliar para cualquier cantidad de proteína, pero la concentración de la proteína debe ser al menos de 2 mg/ml para obtener unos resultados óptimos. Recomendamos probar tres grados de etiquetado distintos, utilizando tres proporciones molares diferentes del reactivo en la proteína.

El éster NHS BODIPY™ suele disolverse en dimetilformamida (DMF) anhidra o dimetilsulfóxido (DMSO) de gran calidad, y la reacción se lleva a cabo en un tampón de bicarbonato sódico de 0,1 a 0,2 M, pH 8,3, a temperatura ambiente durante 1 hora. Dado que la pKa de la amina terminal es inferior a la del grupo amino épsilon de lisina, puede realizar un etiquetado más selectivo de la terminal amina mediante un tampón más cercano al pH neutro.

Purificación del conjugado
Los anticuerpos etiquetados se separan normalmente del colorante BODIPY™ mediante una columna de filtración en gel, como Sephadex™ G-25, BioGel™ P-30 o equivalentes. Para cantidades mucho mayores o menores de proteínas, seleccione un medio de filtración en gel con un corte de peso molecular adecuado o purifique por diálisis. Ofrecemos varios kits de purificación optimizados para diferentes cantidades de conjugado de anticuerpos:
Kit de purificación de conjugados de anticuerpos para 0,5-1 mg (A33086)
Kit de purificación de conjugados de anticuerpos para 20-50 μg (A33087)
Kit de purificación de conjugados de anticuerpos para 50-100 μg (A33088)

Más información acerca del etiquetado de proteínas y anticuerpos
Ofrecemos una amplia selección de kits de etiquetado de anticuerpos y proteínas Molecular Probes™ que se ajustan a su material de partida y a su configuración experimental. Consulte nuestros kits de etiquetado de anticuerpos o utilice nuestra herramienta de selección química de etiquetado para otras opciones. Para obtener más información acerca de nuestros kits de etiquetado, lea Kits para etiquetado de proteínas y ácidos nucleicos: sección 1.2 del manual de Molecular Probes™.

Personalizaremos el conjugado que desee
Si no encuentra lo que busca en nuestro catálogo en línea, prepararemos el conjugado de anticuerpos o proteínas que desee.’’’’ Nuestro servicio de conjugación personalizada es eficiente y confidencial, y garantizamos la calidad de nuestro trabajo. Contamos con la certificación ISO 9001:2000.