Invitrogen™ CellEvent™ Senescence Green Detection Kit

Descripción

Esta sonda a base de fluoresceína contiene dos porciones de galactosidas, lo que la convierte en un objetivo para la β-galactosidasa. La activación de βgalactosidasa se usa comúnmente como biomarcador para las células senescentes. Esta enzima hidrolasa reside en lisosomas y convierte βgalactosidos en monosacáridos en condiciones de pH ácido. El producto enzimáticamente descompuesto se retiene dentro de la célula debido a la unión covalente de proteínas intracelulares y emite una señal fluorogénica que tiene una absorción/emisión máxima de 490/514 nm.

Las características del kit incluyen:
• Detección fluorescente fiable y rápida de células senescentes
• Mayor sensibilidad que la colorimétrica X-Gal tradicional
• La señal fluorescente está bien conservada y. se detecta utilizando los conjuntos de filtros estándar Alexa Fluor™ 488/FITC
• La sonda de senescencia de activación múltiple: fluorescente se puede multiplexar

Debido a una vida útil replicativa limitada, las células normales entran en la detención del ciclo celular, también conocida como senescencia celular. Mientras se encuentran en esta fase de senescencia, las células permanecen metabólicamente activas sin sufrir la muerte o división celular. Adoptan un fenotípico específico que incluye la aparición de múltiples núcleos, aumento de la vacuolización, expresión de la β-galactosidasa dependiente del pH y ampliación y extensión morfológicas. La senescencia, a través varios mecanismos, puede desempeñar un papel en la supresión del tumor, en la progresión del tumor, en el envejecimiento y la reparación de tejidos.

La activación de βgalactosidasa se usa comúnmente como biomarcador para las células senescentes. Esta enzima hidrolasa reside en lisosomas y convierte βgalactosidos en monosacáridos en condiciones de pH ácido. La actividad es óptima en el pH lisosómico 4, pero los ensayos convencionales miden en pH 6. Se ha demostrado que la actividad de la β-galactosidasa normalizada es el doble de alta en las células senescentes que en las presenescentes, independientemente del valor de pH usado para las pruebas.

Para detectar la actividad metabólica en células in vitro, se ha utilizado durante mucho tiempo un sustrato colorimétrico para la β-galactosidasa, 5-bromo-4-cloro-3-indolil-β-D-galactopiranósido (X-Gal). Sin embargo, su uso es limitado debido a la inconsistencia de la señal, la duración del ensayo y la incapacidad de multiplexar.

Por lo tanto, hemos desarrollado un sustrato fluorescente sensible a la β-galactosidasa que puede usarse para la detección de células senescentes. La sonda verde de senescencia CellEvent™ es un reactivo a base de fluoresceína que contiene dos porciones de galactosidas, lo que la convierte en un objetivo específico de la β-galactosidasa. El producto descompuesto por enzimas se retiene dentro de la célula debido a la unión covalente de proteínas intracelulares y emite una señal fluorogénica que tiene una absorción/emisión máxima de 490/514 nm.

El kit verde senescente CellEvent™ proporciona una sonda verde senescente CellEvent™ y un tampón optimizado para la detección de células senescentes en muestras fijas. Esta sonda se puede multiplexar con otros reactivos fluorescentes compatibles con la fijación de paraformaldehído.