Thermo Scientific™ Kit de clonación de PCR CloneJET™ con células competentes DH10B

• Este paquete incluye el kit de clonación de PCR CloneJET (20 o 40 reacciones) y células competentes DH10B optimizadas para su uso con el kit, y se puede transformar directamente con el producto de ligadura

Kit de clonación de PCR CloneJET
Un avanzado sistema de selección positiva para la clonación de alta eficacia de productos de PCR generados con cualquier ADN polimerasa termoestable. Se puede clonar cualquier fragmento de ADN con extremos cohesivos o romos. El kit funciona bien con fragmentos de ADN fosforilados y no fosforilados. La ligadura al vector de selección positiva incluido solo tarda unos 5 minutos y produce más del 99 % de clones recombinantes. Los productos de PCR con extremos romos generados con una enzima de corrección se ligan directamente al vector de clonación.

Los productos de PCR generados con ADN polimerasas no de corrección o con mezclas de ADN polimerasas se deben despuntar antes de la ligadura en una reacción de 5 minutos con la enzima de conversión en extremos romos del ADN termostable que se proporciona con el kit. Las células competentes DH10B están optimizadas para su uso con este kit y se pueden transformar directamente con el producto de ligadura.

Contiene el novedoso vector de clonación de selección listo para su uso pJET1.2/blunt. El vector contiene un gen enzimas de restricción letal que se interrumpe con la ligadura de un inserto de ADN en el sitio de clonación. Como resultado, solo las células bacterianas con plásmidos recombinantes pueden formar colonias. Las moléculas del vector pJET1.2/blunt que no disponen de insertos expresan una enzima de restricción letal, que mata la célula de E. coli huésped después de la transformación. Esta selección positiva acelera drásticamente el proceso de identificación de colonias y elimina los costes adicionales necesarios para la selección de color azul/blanco.

• Rápido: clonación de PCR en solo 5 minutos
• Máxima eficacia: 99 % de clones positivos
• Sin fondo de clonación: vector de selección positiva
• Versátil: idóneo para clonación de extremo romo o adherente
• Económico: evita los costes del cribaje de color azul/blanco

Aplicaciones:

• Clonación de productos de PCR de extremo romo o cola 3‘ dA hasta 10 kb
• Clonación de fragmentos de ADN generados por enzimas de restricción
• Secuenciación del ADN clonado
• Transcripción in vitro e in vivo de insertos clonados del promotor T7

Células competentes DH10B
Células de E.coli de alta eficacia y competencia química. La cepa DH10B es adecuada para la clonación de ADN que contiene metilcitosina y metiladenina, lo que permite clonar de forma eficaz tanto el ADN genómico procariótico como el eucariótico. Estas células son ideales para la construcción de bibliotecas de ADNc utilizando vectores derivados de plásmidos. Genotipo: F– mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ (ara-leu)7697 galU galK λ– rpsL(StrR) nupG.

• Alta eficacia de transformación: >1x109 cfu/μg pUC19 ADN
• Adecuado para aplicaciones de clonación rutinarias y de alto rendimiento
• Cómodo envasado de dos reacciones por vial
• El medio de SOC Medio de crecimiento incluido