Thermo Scientific™ Fosfatasa alcalina termosensible FastAP (1 U/μl)

Descripción

FastAP Thermosensitive Alkaline Phosphatase cataliza la liberación de los grupos 5′- y 3′-fosfato de ADN, ARN y nucleótidos. Esta enzima también elimina grupos de fosfato de proteínas.

FastAP es una fosfatasa alcalina novedosa que está activa en todos los tampones de enzimas de restricción Thermo Scientific, así como en los tampones de PCR. Desfosforila todos los tipos de extremos de ADN (romos, 5' y 3'-protuberantes) en 10 minutos a 37 °C. La enzima se inactiva en 5 minutos a 75 °C. Por lo tanto, no es necesario extraer la fosfatasa alcalina antes de la ligadura.

Características destacadas

• Enzima recombinante
• Desfosforilación rápida: 10 minutos a 37 °C
• Inactivación rápida y completa: 5 minutos a 75 °C
• Digestión y desfosforilación simultáneas de ADN de vector
• 100 % activa en tampones de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y enzimas de restricción
• Un protocolo para todos los tipos de extremos de ADN:
  • 5’-protuberantes
  • 3’-protuberantes
  • extremos romos
  • nucleótidos únicos
• Limpieza de PCR junto con Exo I
• Desfosforilación de proteínas

Aplicaciones

• Desfosforilación del ADN del vector de clonación para evitar la recircularización durante la ligadura
• Digestión y desfosforilación simultáneas de ADN de vector
• Limpieza del producto de PCR: degradación de nucleótidos antes de secuenciación del producto de PCR
• Desfosforilación de ácido nucleico 5'-termini antes del etiquetado con polinucleótido quinasa T4
• Otras aplicaciones en las que es necesaria la desfosforilación de sustratos de ADN y ARN
• Desfosforilación de proteínas

Nota

• La unión de FastAP Thermosensitive Alkaline Phosphatase al ADN puede provocar un desplazamiento de bandas en geles de agarosa. Para evitarlo, incube las muestras con colorante de carga de ADN 6X y solución SDS a 65 °C durante 10 minutos y enfríelas con hielo antes de la electroforesis.
• FastAP Thermosensitive Alkaline Phosphatase está activa en todos los tampones de enzimas de restricción y pueden añadirse directamente al ADN digerido. No es necesaria la inactivación por calor de la enzima de restricción antes de la reacción de desfosforilación.