Thermo Scientific™ Eco31I (BsaI) (10 U/μl)

5'...G G T C T C (N)₁▵...3'

3'...C C A G A G (N)₅▵...5'

Condiciones para una actividad del 100 %:

• 1 tampón G: 10 mm de Tris-HCl (pH 7,5 a 37 °C), 10 mm de MgCl₂, 50 mm NaCl y 0,1 mg/ml de BSA
• Incubar a 37 °C.

Tampón de almacenamiento:

• Eco31I se suministra en: 10 mm de Tris-HCl (pH de 7,5 a 25 °C), 200 mm de KCl, 1 mm de DTT, 0,1 mm de EDTA, 0,2 mg/ml de BSA y 50 % (v/v) de glicerol

Ligadura y refragmentación:

• Tras una sobredigestión con 50 veces la cantidad recomendada de Eco31I, más del 95 % de los fragmentos de ADN pueden ligarse y recortarse

Efectos de metilación:

• Dam: nunca se solapa, sin efecto.
• Dcm: puede solaparse, reducción de fragmentación.
• CpG: puede solaparse, reducción de fragmentación.
• EcoKI: nunca se solapa, sin efecto.
• EcoBI: puede solaparse, efecto sin determinar.

Digestión del ADN integrado en agarosa:

• Se requieren como mínimo 5 u de la enzima para la digestión completa de 1 μg de ADN lambda integrado en agarosa en 16 horas

Nota:

Analizado mediante ADN de lambda (dcm-) (SD0021), ya que uno de los dos sitios de reconocimiento Eco31I en el ADN lambda es difícil de escindir. La fragmentación con Eco31I se reduce debido a la metilación de dcm solapante. Para evitar la metilación dcm, utilice una cepa con dam, dcm-, como GM2163 (M0099). La concentración baja de sales, la concentración alta de glicerol (> 5 %), un pH >8 o un gran exceso de la enzima pueden producir actividad estrella (star activity). La Eco31I se disocia tras reconocer su sitio y puede generar cualquier extremo 5' de base 4 deseado. Esta función es útil para la clonación directa de productos de PCR.