Thermo Scientific™ Esp3I (BsmBI) (10 U/μl)

Descripción

ADN lambda digerido con Esp3I (BsmBI), agarosa al 1 %, 14 sitios de escisión

Las endonucleasas de restricción convencionales representan una gran colección de enzimas de restricción de alta calidad, optimizadas para funcionar en uno de los tampones del sistema de cinco tampones. Además, se proporciona el tampón universal Tango para mayor comodidad en digestiones dobles. Todas las enzimas muestran una actividad del 100 % en las condiciones de reacción y tampón recomendadas. Para garantizar uniformidad en el rendimiento, los tampones de enzimas de restricción Thermo Scientific contienen BSA previamente mezclada, lo que mejora la estabilidad de numerosas enzimas y fija sustancias contaminantes que pueden estar presentes en preparaciones de ADN.

5'...C G T C T C (N)₁▵...3'

3'...G C A G A G (N)₅▵...5' Condiciones para una actividad al 100 %:

• [1 tampón Tango] + DTT: [33 mm de Tris-acetato (pH 7,9 a 37 °C), 10 mm de Mg-acetato, 66 mm de K-acetato y 0,1 mg/ml de BSA] + 1,0 mm de DTT
• Incubar a 37 °C.

Tampón de almacenamiento:

• Esp3I se suministra en: 10 mm de fosfato potásico (pH 7,4 a 25 °C), 100 mm de KCl, 1 mm de EDTA, 1 mm de DTT, 0,5 mg/ml de BSA y 50 % (v/v) de glicerol

Ligadura y refragmentación:

• Tras una sobredigestión con 50 veces la cantidad recomendada de Esp3I, más del 95 % de los fragmentos de ADN pueden ligarse y recortarse

Efectos de metilación:

• Dam: nunca se solapa, sin efecto.
• Dcm: nunca se solapa, sin efecto.
• CpG: se solapa completamente, bloqueada.
• EcoKI: nunca se solapa, sin efecto.
• EcoBI: puede solaparse, efecto sin determinar.

Digestión del ADN integrado en agarosa:

• Se requieren como mínimo 5 unidades de la enzima para la digestión completa de 1 μg de ADN lambda integrado en agarosa en 16 horas

Nota:

La enzima requiere DTT. Debe añadirse DTT recién hecho al tampón de reacción. La Esp3I se disocia tras reconocer su sitio y puede generar cualquier extremo 5' de base 4 deseado. Esta función es útil para la clonación de productos de PCR.