Thermo Scientific™ NotI, HC (50 U/μL)

Descripción

Thermo Scientific™ NotI está disponible como enzima FastDigest que se utiliza para la digestión rápida del ADN, más del 95 % de los fragmentos de ADN digeridos pueden ligarse y recortarse si el extremo 5′ presenta una concentración de 0,5 μm después de una sobredigestión con 50 veces la cantidad recomendada (3 U/μg de ADN x 17 horas) de NotI.

5'..G C▵G G C C G C...3'

3'..C G C C G G▵C G...5'

Condiciones para una actividad del 100 %:

• 1 tampón O: 50 mm de Tris-HCl (pH 7,5 a 37 °C), 10 mm de MgCl₂, 100 mm de NaCl y 0,1 mg/ml de BSA
• Incubar a 37 °C.

Tampón de almacenamiento:

• Notl se suministra en: 20 mm de Tris-HCl (pH 7,8 a 25 °C), 100 mm de NaCl, 0,1 mm de EDTA, 1 mm de DTT, 0,02 % de Triton X-100, 0,2mg/ml de BSA y 50 % (v/v) de glycerol

Ligadura y refragmentación:

• Tras una sobredigestión con una cantidad 50 veces mayor a la recomendada de Notl, más del 95 % de los fragmentos de ADN pueden ligarse y recortarse

Efectos de metilación:

• Dam: nunca se solapa, sin efecto.
• Dcm: nunca se solapa, sin efecto.
• CpG: se solapa completamente, bloqueada.
• EcoKI: nunca se solapa, sin efecto.
• EcoBI: nunca se solapa, sin efecto.

Digestión del ADN integrado en agarosa:

• Se requieren como mínimo 5 unidades de la enzima para la digestión completa de 1 μg de ADN de adenovirus-tipo-2 integrado en agarosa en 16 horas

Extremos compatibles:

• Bsp120I, CfrI, Eco52I

Nota:

Analizado con ADN plasmídico pTZ19RJL2 digerido con BseLI. Los pásmidos súperhelicoidales pueden necesitar hasta 5 veces más NotI para una digestión completa que los ADN lineales.