IBA Lifesciences Strep-Tactin Sepharose 4FF de flujo por gravedad

Descripción

El sistema de purificación Strep-tag™ se basa en la interacción muy selectiva y fácilmente controlable entre el péptido Strep-tag™II y el sitio de unión de biotina de una estreptavidina, especialmente diseñada, llamada Strep-Tactin™.
Strep-tag™II tiene una unión a Strep-Tactin™ casi 100 veces más ajustada que la estreptavidina, pero eluye bajo condiciones fisiológicas suaves. La purificación rápida por afinidad en un solo paso da como resultado proteínas de fusión activa de máxima pureza. Se pueden utilizar tampones fisiológicos como PBS en combinación con una amplia gama de detergentes, queladores, sal y condiciones de redox. La elución competitiva con destiobiotina, un análogo de biotina estable, de unión reversible y barato, permite factores de purificación sin precedentes. El sistema es seguro y fácil de usar; la regeneración de la columna y el estado de actividad se visualizan mediante un cambio de color en la columna de purificación. Un beneficio particular de Strep-tag™II es su composición neutra de aminoácidos que no dificulta el plegado o la secreción de proteínas, ni interfiere con la función de las proteínas. Strep-tag™ permite la purificación de proteínas recombinantes con una pureza superior al 99 % en un solo paso a partir de lisados crudos. Los factores extraordinarios de purificación se basan en i) muy baja tendencia deStrep-Tactin™ para unirse a otras proteínas no específicas, ii)Strep-tag™II muy específico: interacción Strep-Tactin™ y iii) elución competitiva específica con cantidades diminutas de destiobiotina. Además, la estabilidad extrema de Strep-Tactin™ es la base de resinas de afinidad robustas.
El ciclo de purificación de proteínas Strep-tag™
. Procedimiento de purificación en condiciones fisiológicas. La purificación de proteínas de fusión Strep-tag™II puede realizarse en condiciones casi fisiológicas, por ejemplo, en tampón PBS y para elución en tampón de destiobiotina PBS/2,5 mM:
Pasos 1 y 2:
El lisado celular se añade a la columna. Una vez que la proteína marcada se ha ligado específicamente a Strep-Tactin™, las proteínas huésped se eliminan rápidamente con pequeñas cantidades de tampón de lavado fisiológico.
Paso 3:
A continuación, la proteína unidaStrep-tag™II se eluye suavemente añadiendo tampón de lavado que contiene adicionalmente 2,5 mM de destiobiotina que compite específicamente por el bolsillo de unión de biotina. Dado que las condiciones del tampón durante la elución permanecen esencialmente sin cambios, las proteínas potencialmente inespecífica vinculantes (sin Strep-tag™) no se eluirán y, por lo tanto, no contaminará la proteína de interés. Junto a la unión específica de Strep-tag™ a Strep-Tactin™, esta es la segunda etapa de especificidad que confiere este procedimiento de purificación, produciendo una pureza de proteína extremadamente alta.
Pasos 4 y 5:
Para regenerar la columna se añade el tinte azoico amarillo HABA (ácido 2-[4-hidroxi-benceneazo]benzoico) en exceso para desplazar la destiobiotina del bolsillo de unión. Una vez que HABA se une al sitio de unión, el color se vuelve rojo indicando convenientemente el estado de regeneración y actividad de la columna.
Paso 6:
HABA se puede eliminar simplemente añadiendo tampón de lavado. Una vez que el color rojo ha desaparecido, la columna se puede reutilizar. La resina Strep-Tactin™ puede regenerarse y reutilizarse de 3 a 5 veces sin pérdida de rendimiento.
Resinas Strep-Tactin™
para la purificación por afinidad Strep-tag™. Hay disponibles varias versiones de resina Strep-Tactin™ que difieren en sus propiedades y aplicaciones. Mientras que Strep-Tactin™ Sepharose™ se utiliza preferentemente para cromatografía de flujo por gravedad, Strep-Tactin™ Superflow™, el nuevoStrep-Tactin™ Superflow™ de alta capacidad y Strep-Tactin™ MacroPrep™, también se pueden utilizar para aplicaciones de baja presión, FPLC y HPLC, y Strep-Tactin™ POROS™ (20 y 50) para cromatografía de FPLC y HPLC. Además, Superflow es especialmente adecuado para mayores caudales y para la purificación de grandes complejos proteicos.
Cartuchos H-PR ('muy resistentes a la presión') (N.º 5).
Los cartuchos H-PR están diseñados principalmente para su uso con estaciones de trabajo de cromatografía que utilizan de 10 a 32 accesorios (por ejemplo, HPLC y AKTA™). Sin embargo, también pueden funcionar con otras estaciones de trabajo, jeringas o bombas peristálticas mediante el uso de adaptadores comunes. Dado que las carcasas de columna son muy resistentes a la presión (hasta 20 bar), los cartuchos H-PR se pueden utilizar con un limitador de flujo. Los cartuchos se pueden conectar en serie para aumentar la capacidad.
La etiqueta corta no influye en la proteína

• Purificación rápida en un solo paso en condiciones fisiológicas
• Pureza y bioactividad inigualables