Invitrogen™ Kit TOPO™ TA Cloning™ para secuenciación, sin células competentes

Descripción

Cada kit utiliza el vector pCR™ 4-TOPO TA con sitios de primers de secuenciación especialmente diseñados que devuelven menos secuencia de vector y más secuencia de inserto en cada reacción, y están disponibles con una serie de células competentes, o sin ellas, dependiendo de sus necesidades y presupuesto. Estos kits incluyen todo lo necesario para clonar y seleccionar vectores recombinantes que contienen los fragmentos de PCR que elija.

Kits de TOPO TA Cloning para secuenciación: visión general
Vector: vector pCR4-TOPO TA: vector de clonación optimizado para mejorar los resultados de secuenciación
Método de clonación: TOPO™ TA Cloning™: Ligación en 5 minutos con base de Topoisomerasa I de productos PCR con salientes 3A (amplificados con Taq) al vector
Células competentes: Varias opciones: seleccione entre kits con células generales, de alta eficacia, con resistencia T1 bacteriófaga o competentes de rápido crecimiento, o utilice las suyas propias
vector pCR4-TOPO TA: optimizado para la secuenciación
Hemos eliminado gran parte del sitio de clonación múltiple del vector pCR4 TOPO TA para acortar la distancia entre los sitios de cebadores de secuenciación y el sitio del inserto a tan solo 33 bp. De este modo, las reacciones de secuenciación proporcionan menos secuencia de vector y más secuencia de inserto. El vector pCR4-TOPO TA tiene sitios para 4 primers de secuenciación comunes: M13 directo, M13 inverso, T7 y T3. Los kits incluyen una alícuota de cada uno de ellos.
Manipulación y selección de clones de pCR4-TOPO TA
El vector TA pCR4-TOPO TA contiene marcadores de resistencia de ampicilina y kanamicina y la fusión de genes LacZα-ccdB para selección positiva y cribaje azul/blanco. El sitio de clonación múltiple minimizado del vector aún incluye sitios EcoRI de flanqueo para la escisión simplificada de productos de PCR clonados y un único sitio Sse8387I para la generación de eliminaciones anidadas antes de la secuenciación. Los promotores T7 y T3 están también presentes para la transcripción in vitro.
Clonación simplificada basada en TOPO
Mediante la tecnología de clonación TOPO, no hay necesidad de emplear primers de PCR que contengan secuencias específicas, procedimientos posteriores a la PCR, preparación de vectores u otros pasos de manipulación de ADN que consumen mucho tiempo. Solo tiene que añadir su reacción de PCR directamente al vector cargado con la topoisomerasa suministrado, incubar 5 minutos y transformar con las células competentes de E. coli proporcionadas.
Clonación eficiente
Con hasta un 95 % de los clones transportado al inserto deseado, podrá filtrar menos clones, lo que le ayudará a ahorrar tiempo y dinero. El vector pCR4-TOPO TA utilizado en este kit viene con salientes 3'T para la ligadura eficaz de productos de PCR amplificados con Taq, que contienen salientes 3'A.
El estándar de clonación
En lo que se refiere a la clonación, la tecnología de clonación TOPO ha sido un socio fiable para miles de científicos durante más de diez años. Rápida, fácil de usar y eficiente, la clonación TOPO se ha aplicado a muchos vectores distintos para multitud de aplicaciones.
Kits TOPO TA Cloning para secuenciación: opciones de kits
El kit TOPO TA Cloning para secuenciación puede adquirirse con diversas células competentes que ofrecen distintas ventajas dependiendo de sus necesidades:

• Clonación general: TOP10 (n.º de cat. K4575-J10, K4575-01, K4575-40)
• Clonación de gran eficacia: Células TOP10 Electrocomp™ (n.º de cat. K4580-01, K4580-40)
• Clonación general, resistencia T1 bacteriófaga: DH5α-T1R (n.º de cat. K4595-01, K4595-40)
• Crecimiento rápido: E. Coli Mach1™-T1R químicamente competente (n.º de N.º K4530-20)
• Utilice sus propias células: flexibilidad y ahorro (n.º de de cat. 450030)

También ofrecemos una versión del kit que incluye un kit de minipreparación rápida de plásmidos PureLink™ (n.º de cat. K4575-02) para utilizar en el aislamiento de un plásmido recombinante limpio y listo para secuenciación.

• Resistente a ampicilina (AmpR) y kanamicina (KanR)
• Obtenga más secuencia: permite obtener más secuencia de inserto y menos secuencia de vector cuando se utilizan los primers de secuenciación estándar
• Rápido y fácil: de PCR a clones en solo tres pasos y en tan solo 5 minutos de manipulación
• Eficiente: obtenga hasta el 95 % de clones con el inserto adecuado
• Probado: rendimiento fiable durante más de una década con más de 4000 citas

Clonación, clonación por PCR