Invitrogen™ Click-iT™ EdU Alexa Fluor™ 647 HCS Assay

Descripción

El ensayo Click-iT EdU Alexa Fluor 647 HCS es una excelente alternativa a los ensayos de proliferación tradicionales que se ha optimizado para aplicaciones de adquisición de imágenes de alto contenido. En este ensayo, el análogo a la timidina modificado EdU se incorpora de forma eficaz al ADN recién sintetizado y etiquetado con fluorescencia mediante un colorante brillante y fotoestable Alexa Fluor en una reacción clic rápida y muy específica. Este etiquetado fluorescente de las células proliferantes es preciso y compatible con métodos de anticuerpos gracias al protocolo clic leve. Los métodos de detección de proliferación más exactos se basan en la incorporación y la medición de los análogos nucleósidos en ADN recién sintetizado con bromodesoxiuridina (BrdU), un análogo utilizado con frecuencia. El ADN etiquetado mediante BrdU se cuantifica mediante anticuerpos anti-BrdU tras la desnaturalización del ADN a través de métodos intensos (HCl, calor o enzimas) para exponer las moléculas de BrdU. Este paso tiene una larga duración y resulta difícil de llevar a cabo de manera uniforme. El tratamiento intenso también puede afectar negativamente a la calidad e integridad de la muestra, lo que hace que la cotinción con otros anticuerpos resulte complicada.

• Simple: funciona la primera vez, cada vez, en menos tiempo.
• Eficaz: no es necesario realizar pasos de desnaturalización ni tratamientos intensos
• Resultados ricos en contenido: mejor preservación de la morfología de la célula, la estructura del antígeno y la integridad del ADN.
• Coherente: no depende de lotes de anticuerpos variables para la detección
• Menos peligroso

Metodología de proliferación mejorada
El ensayo Click-iT EdU Alexa Fluor 647 HCS proporciona una alternativa mejorada con respecto a los ensayos BrdU para medir la proliferación de células. EdU (5-etinil-2'-desoxiuridina) es un nucleósido análogo de la timidina que se incorpora al ADN durante la síntesis de ADN activa. Gracias a Click-iT EdU, basta con una permeabilización con detergente y una fijación suave para que el reactivo de detección Click-iT EdU basado en moléculas pequeñas obtenga acceso al ADN. Como consecuencia, el ensayo Click-iT EdU HCS no solo es fácil de usar, sino que también es más exacto y compatible con el análisis del ciclo celular y otros objetivos extracelulares o intracelulares verdaderamente ricos en contenido y resultados.

El ensayo Click-iT puede emplearse en células en cultivo o in vivo siguiendo la administración de EdU a través de métodos de alimentación o inyección. El ensayo Click-iT puede emplearse con BrdU en experimentos de pulso doble mediante el anticuerpo ant-BrdU (clon MoBu-1), que no presenta una reacción cruzada con EdU. La tecnología Click-iT es compatible con inmunohistoquímica, inmunocitoquímica y colorantes fluorescentes que presentan tolerancia ante la fijación o se han diseñado para el etiquetado celular fijo.

Análisis celular, ciclo celular, proliferación celular, viabilidad celular, proliferación y función, adquisición de imágenes celulares, replicación y reparación de ADN, detección de alto contenido (HCS)

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