Thermo Scientific™ Active Rho Pull-Down and Detection Kit

Descripción

Mida la activación de las GTPasa pequeñas aislándolas a través de sus efectores de flujo de salida específicos con los kits de extracción y detección de GTPasa activa Thermo Scientific™ Pierce.

Pierce Active GTPase Pull-Down and Detection Kits miden la activación de pequeñas GTPasas aislándolas de sus efectores específicos posteriores. Se ofrecen kits específicos para las GTPasas Arf1, Arf6, Cdc42, Rac1, RalA, Rap1, Ras, y Rho. El dominio de unión correspondiente al efector posterior de cada GTPasa pequeña se expresa como una proteína de fusión con GST. Cuando se inmoviliza en una resina, se utiliza esta proteína de fusión para el «pull-down» de la GTPasa activa (es decir, unión a GTP). El paso de purificación de afinidad de «pull-down» se realiza con facilidad y comodidad con las columnas de centrifugado para microcentrífugas. Después de un paso de lavado simple, la GTPasa unida se recupera eluyendo la proteína de fusión con GST de la resina de glutatión con un tampón de carga de muestras SDS-PAGE. A continuación, la GTPasa purificada se detecta con el método Western blot y el anticuerpo específico que se suministra en cada kit.

Todos los kits de GTPasa incluyen proteína de fusión con GST del dominio de unión específico, activadores de GTPγS y GDP, resina de agarosa de glutatión, tampón de lavado/unión/lisis, anticuerpo primario, tampón de muestras SDS 2X, columnas de centrifugado y tubos de recogida. Todos los kits contienen componentes suficientes para 30 ensayos de «pull-down». Los kits están optimizados para la detección de Western blot con un anticuerpo secundario conjugado con HRP (n.° de pieza 31460 para conejo; n.° de pieza 31430 para ratón), utilizando el sustrato quimioluminiscente Thermo Scientific™ SuperSignal West Pico (n.° de pieza 34080).

Características destacadas:

• Gran sensibilidad y precisión: los reactivos optimizados, los anticuerpos específicos y el procedimiento de Western blot garantizan controles precisos y resultados cuantitativos

• Comodidad: no tiene que expresar ni purificar sus propias proteínas de fusión con GST-PBD o RBD ni utilizar costosas resinas de afinidad de inmunoprecipitación con base de anticuerpos

• Velocidad: incubación simultánea del lisado celular con GST-PBD o RBD y la resina de glutatión directamente en una columna de centrifugado para microcentrífugas de gran rendimiento

• Facilidad de uso: los reactivos y las condiciones de «pull-down» se han optimizado para un éxito inmediato, incluso para usuarios principiantes

• Eficiencia: los tubos de recogida y las columnas de centrifugado para microcentrífugas proporcionan una separación eficiente del líquido y la resina, lo que evita que se pierda muestra

• Completos: los kits incluyen reactivos para purificación de afinidad, así como controles, un tampón de lisis celular compatible y un anticuerpo primario específico para la detección definitiva mediante el método Western blot

Proteínas de fusión GST de dominios activos de unión de GTPasa:

• El dominio de unión a Ras de Raf1 (RAF1-RBD) se une a Ras activa
• El dominio de unión a p21 de Pak1 (Pak1-PBD) se une a Rac1 y Cdc42 activas
• El dominio de unión a Rho de Rhotokin (Rhotokin-RBD) se une a Rho activo
• El dominio de unión a Rapo1 de RalGDS (RalGDS-RBD) se une a Rapo1 activo
• El dominio de unión a proteínas de GGA3 (GGA3-PBD) se une a Arf1 y Arf6 activos
• La proteína 1 de unión Ral (RalBP1) se une a la RalA activa

Incluye:

Proteína de fusión con GST de dominio de unión específico, resina de agarosa de glutatión, GTPγS y GDP (100X), tampón de lavado/unión/lisis, anticuerpo primario específico de GTPasa, tampón de carga de muestras SDS-PAGE (2X), columnas de centrifugado y tubos de recogida