Thermo Scientific™ Pierce™ Monomeric Avidin Agarose

Las resinas y el kit de avidina monomérica Pierce los únicos soportes de unión de biotina que posibilitan la purificación por afinidad no desnaturalizante de moléculas biotiniladas. La proteína de avidina monomérica inmovilizada se une a biotina con alta especificidad y moderada afinidad, lo que permite el lavado y eliminación de las moléculas que no son de biotina, y que las moléculas unidas marcada con biotina se puedan eluir competitivamente utilizando 2 mM de biotina en una solución salina tamponada con fosfato (PBS). La técnica facilita las condiciones de elución más suaves para la purificación de proteínas biotiniladas y evita tanto la contaminación como los demás problemas asociados con los métodos de avidina y estreptavidina tradicionales. De esta manera, se puede regenerar la columna de avidina monomérica con 0,1 M de glicina para eliminar la columna de biotina unida residual sin perder la capacidad para unir otra muestra biotinilada.

Con avidina o estreptavidina típica, la afinidad de unión de la biotina (Kd = 10^-15M) es tan grande que la purificación con estos medios tradicionales requiere de condiciones desnaturalizantes para la elución, como 8 M de guanidina·HCl con pH 1,5 o la ebullición en tampón de carga de muestra reductor para SDS-PAGE. Además de los efectos adversos sobre la proteína biotinilada de interés, estas duras condiciones de elución suelen causar la aparición de proteínas extrañas (es decir, subunidades de avidina o estreptavidina) que se eliminan de la resina y se eluyen conjuntamente con el producto de purificación deseado. En contraste, cuando la avidina se acopla a una resina (por ejemplo, agarosa granulada entrecruzada o resina UltraLink) como monómero de la subunidad, mantiene su especificidad para la biotina aunque su afinidad de unión con biotina disminuye a un nivel (Kd = 10^-8M) que genera la elución subsiguiente.

Características destacadas:

• No desnaturalizante: purifica los productos biotinilados utilizando condiciones de elución suaves (2 mM de biotina libre).

• Reutilizable: la agarosa avidina monomérica reutilizable puede regenerarse y reutilizarse al menos 10 veces, con una pérdida marginal en la capacidad de unión de biotina (disminución de aproximadamente el 2,5 % por regeneración).

• Específica: conserva la especificidad de la unión de biotina y la baja unión no específica de la avidina nativa.

• Flexible: permite enlazar muestras de forma flexible en una variedad de tampones fisiológicos y eluirlas con 0,1 M de glicina o por competición con 2 mM de biotina.

• Buena capacidad de unión: superior a 1,2 mg de BSA biotinilada por ml de resina.

• Práctica: puede adquirir agarosa o resinas UltraLink™ por separado o un kit completo de purificación con columnas preempaquetadas y tampones.

Características específicas del producto:

• Las resinas de agarosa y el kit se basan en gránulos de agarosa entrecruzados al 4 %.
• La resina UltraLink es un soporte de acrilamida (soporte biológico UltraLink).

Incluye:

El kit contiene una columna preenvasada de agarosa avidina monomérica y tampones de unión y elución.