Thermo Scientific™ Pierce™ S-Nitrosylation Western Blot Kit and HENS Buffer

Descripción

The Pierce S-Nitrosylation Western Blot Kit provides cell lysis/reaction buffer, sulfhydryl-reactive blocking agent, reducing agent, labeling agent, and anti-TMT antibody to label 40 samples (100 μg each). As with traditional S-nitrosylation switch assays, unmodified cysteines are blocked by a sulfhydryl-reactive compound. S-nitrosylated cysteines are selectively reduced with ascorbate in HENS Buffer for labeling with iodoTMTzero reagents, which irreversibly bind to the cysteine thiol that was S-nitrosylated. Detection of the TMT reagent-modified proteins is facilitated using an anti-TMT antibody.

La S-nitrosilación es una modificación postraslacional que regula numerosos procesos, como la proliferación celular, la apoptosis, la relajación muscular suave, la liberación de neurotransmisores, y la diferenciación. Durante la S-nitrosilación, los radicales de óxido nítrico reaccionan con los tioles de cisteína para producir un aducto S-NO que altera la actividad proteica.

Kit de Western Blot de S-nitrosilación Pierce
El kit de Western Blot Pierce S-nitrosilation proporciona los reactivos necesarios para realizar una versión modificada del ensayo del interruptor de S-nitrosilación tradicional, incluido un reactivo de bloqueo de cisteína, agente de reducción, tampón de reacción, reactivo de etiquetado iodoTMT y anticuerpo Anti-TMT. El etiquetado se lleva a cabo utilizando el reactivo no biológico iodoTMT en lugar de HPDP-biotina, lo que reduce la señal de fondo durante la detección del Western Blot. Además de la detección de proteínas S-nitrosíladas por Western blot, se puede utilizar una resina anti-TMT inmovilizada para enriquecer selectivamente proteínas/péptidos S-nitrosílidos etiquetados con reactivos iodoTMT. Este flujo de trabajo permite la asignación de sitios de S-nitrosilación y la cuantificación multiplexada mediante espectrometría de masas.

Las características del kit de Western Blot de S-nitrosilación Pierce incluyen:
• Específico: las reacciones de etiquetado específicas optimizadas cambian las modificaciones traslacionales posteriores a la S-nitrosocisteína con el reactivo iodoTMT para una fácil detección por Western blot utilizando anticuerpo antiTMT
• Mejor relación señal-ruido: utiliza un reactivo no biológico de iodoTMT para el etiquetado en lugar de la biotina-HPDP, lo que resulta en menos fondo durante la detección de Western blot
• Compatible con flujos de trabajo: el método de etiquetado es compatible con métodos alternativos de análisis, incluido el enriquecimiento mediante resina antiTMT y la cuantificación multiplex mediante espectrometría de masas
• Práctico: todos los reactivos necesarios están incluidos en un kit

Tampón HENS
El tampón HENS consta de 100 mm HEPES (pH 7,8), 1 mm EDTA, 0,1 mm Neocupromina y 1 % SDS. Es un tampón de lisis celular diseñado para su uso con el kit de Western Blot de nitrosilación Pierce S, que permite la detección sensible de la proteína S-nitrosocisteína después de las modificaciones traslacionales en un kit completo y fácil de usar.