Thermo Scientific™ Rapid Equilibrium Dialysis (RED) Inserts and Plates

Descripción

Las placas base y los insertos del dispositivo de RED Pierce Competition constituyen un sistema especialmente diseñado para evaluar las interacciones de unión competitivas mediante la técnica denominada diálisis de equilibrio rápida (RED). Se desarrollaron en estrecha asociación con la industria farmacéutica para realizar ensayos de unión de proteínas plasmáticas, que constituyen un paso fundamental en el desarrollo de fármacos.

El dispositivo de RED Competition se desarrolló en colaboración con laboratorios farmacéuticos para modelar de forma más precisa las interacciones de fármacos in vivo al permitir realizar experimentos de diálisis de equilibrio con un formato multiplexado que implica la competitividad para la unión entre distintos tejidos. El dispositivo de RED es un aparato para realizar experimentos de diálisis de equilibrio en un formato de alto rendimiento compatible con la automatización, y consta de insertos desechables y una placa base formateada con unas dimensiones de microplaca estándar.

El sistema del dispositivo de RED Competition consta de insertos de tubos de diálisis desechables y una placa base reutilizable con PTFE de alta calidad. La placa base es muy similar a la placa de dispositivos de RED normal, excepto porque está dividida en cámaras de distintos tamaños (pocillos) para colocar de 2 a 8 insertos de dispositivos de RED por pocillo. El formato permite llevar a cabo experimentos de diálisis de competitividad con entre 2 y 15 muestras independientes de tejido o líquido proteínico.

Cada inserto de RED Competition contiene una o dos cámaras de diálisis independientes (cada paquete incluye una selección de ambos tipos). El dispositivo Competition RED no requiere ningún paso de ensamblaje complejo ni ningún equipo especializado, y se puede acceder fácilmente a cada cámara o pocillo desde la parte superior del dispositivo. El dispositivo RED Competition amplía la potencia de la diálisis de equilibrio, ya que facilita el análisis de interacciones de fármacos simultáneas y particionando entre varios tejidos.

Características del dispositivo de diálisis de equilibrio rápido (RED) Competition:
• Fácil de usar: los tubos desechables no requieren ningún paso de prelavado, montaje o equipo especializado.
• Poco tiempo de incubación: el diseño proporciona una alta relación superficie-volumen de la membrana con respecto a la muestra, lo que permite alcanzar el equilibrio en un plazo de 2 a 4 horas.
• Formato flexible: la placa base contiene varios tamaños de cámara diferentes, lo que permite realizar estudios de partición de moléculas pequeñas con entre 2 y 16 muestras de tejido o proteínas sin residuos.
• Resistente: el diseño compartimentado elimina la posibilidad de que se produzcan interferencias o fugas.
• Reproducible y preciso: realice experimentos controlados con varios tejidos para obtener resultados de cribado que tengan una alta previsibilidad para estudios in vivo con modelos animales.
• Calidad validada: la placa base está compuesta por PTFE de alta calidad químicamente inerte, lo que elimina la unión no específica y el riesgo de contaminación; cada lote se prueba funcionalmente en un ensayo de unión a proteínas para garantizar el rendimiento.

Aplicaciones:
• Estudios de ADME-Tox: cribado in vitro de la partición de fármacos entre el plasma y varios tejidos antes de los estudios in vivo con modelos animales
• Ayuda a determinar la formulación de la dosis del fármaco para estudios in vivo
• Estudios de interacción entre fármacos
• Determinación de la constante de disociación y unión competitiva de pequeñas moléculas frente a varias dianas

La determinación de la medida en que una molécula se divide entre plasma y tejidos específicos del cuerpo es una fase fundamental del desarrollo de fármacos porque determina la dosificación del compuesto, la eficacia, el coeficiente de aclaramiento y el potencial de interacciones del fármaco o daño tisular. Aunque la evaluación final de estas variables requiere siempre una dosificación y un análisis en animales, los sistemas de análisis in vitro, que son rápidos y predecibles, resultan muy prácticos para estudios de ADME-Tox.

La diálisis de equilibrio está entre los métodos de análisis in vitro con más éxito para evaluar los requisitos de dosificación y unión de fármacos. La diálisis de equilibrio se utiliza para calcular la fracción de fármaco no unido en el plasma o la partición de fármacos entre glóbulos rojos y plasma, plasma y microsomas hepáticos, o bien plasma y homogeneizados de tejidos. Sin embargo, según muchos estudios de partición de tejidos, ciertos fármacos muestran una unión significativa a tejidos probados individualmente, pero tienen distintas preferencias de unión cuando se trata de la competitividad entre varios tejidos.

Características de los insertos del dispositivo de RED:
Cada inserto desechable de un solo uso está compuesto por dos cámaras, una en cada lado, separadas por un cilindro vertical de membrana de diálisis (MWCO de 8000 o 12 000) validado para una unión inespecífica mínima. Este formato no requiere ningún paso de ensamblaje extenso ni equipo especializado, y se puede acceder fácilmente a cada cámara o pocillo desde la parte superior del inserto tras colocarlo en la placa base. Asimismo, la gran relación superficie-volumen del compartimento de la membrana permite una diálisis rápida, donde se puede lograr el equilibrio en cuatro horas con altos niveles de reproducibilidad y precisión. En muchos casos, los experimentos se pueden completar en menos de 100 minutos.

• Desechable: no requieren prelavado, montaje ni equipo especializado
• Poco tiempo de incubación: la gran superficie de diálisis acelera el equilibrio
• Membrana con MWCO de 8000: valor de corte de peso molecular ideal para estudios de unión proteína-fármaco
• Membrana con MWCO de 12 000 también disponible para moléculas de fármacos más grandes
• Composición de la membrana: celulosa regenerada con poco contenido de glicerol como humectante

Características de las placas base de dispositivos de RED:
Los insertos del dispositivo de RED están diseñados para su uso con las placas base de PTFE reutilizables o de polipropileno de alta densidad desechables. Cada placa base de los dispositivos de RED alberga hasta 48 insertos de dispositivos de RED y ofrece unas dimensiones estándar de una placa de 96 pocillos con una separación de pocillos de 9 × 9 mm compatible con los sistemas automatizados de manipulación de líquidos. Además, las placas base desechables del dispositivo de RED están disponibles precargadas, lo que proporciona comodidad de funcionamiento a los científicos que utilizan aplicaciones de unión a proteínas. No es necesario el acondicionamiento previo de los insertos con la membrana. Al utilizar materiales radioactivos, esta placa de un solo uso se desecha fácilmente para evitar la contaminación y las tareas de limpieza.