Thermo Scientific™ Kit de cuantificación de proteínas SILAC (LysC), DMEM:F-12

Los kits de cuantificación de proteínas Thermo Scientific SILAC - DMEM:F12 se utilizan para el análisis específico de la expresión de proteínas por medio de la espectrometría de masa utilizando el etiquetado de isótopos estables con aminoácidos en cultivos de células (SILAC).

El etiquetado estable de isótopos con aminoácidos en el cultivo celular (SILAC) es un método potente para identificar y cuantificar los cambios diferenciales relativos en muestras de proteínas complejas. Este método emplea la incorporación metabólica in vivo de aminoácidos “pesados” etiquetados 13C o 15N en proteínas, seguida de análisis por espectrometría de masas (MS) para acelerar la identificación, la caracterización y la cuantificación completas de proteínas.

Debido a que los péptidos marcados con aminoácidos pesados y ligeros son químicamente idénticos, coeluyen durante el prefraccionamiento de la columna de fase inversa y, por lo tanto, se detectan simultáneamente durante el análisis de MS. A continuación, se utilizan las intensidades de pico relativas de múltiples péptidos isotópicamente distintos de cada proteína para determinar el cambio medio en la abundancia de proteínas en la muestra tratada.

Cada kit incluye todos los reactivos necesarios para etiquetar isotópicamente células con 13C6 L-lisina-2HCl, incluidos medios, aminoácidos pesados y ligeros y suero dializado. Los derivados de L-arginina-HCl pesados (n.º de referencia 88210, 89990) están disponibles por separado y se pueden combinar con los kits de cuantificación de proteínas SILAC Pierce para mejorar la cobertura de las etiquetas isotópicas de péptidos. Los kits son compatibles con líneas celulares de mamíferos adaptadas para crecer en medios DMEM o RPMI 1640. También hay disponibles kits con formulaciones de medios especializados para líneas de células madre humanas y murinas. Cuando se combinan con los productos de enriquecimiento de muestras de proteínas/péptidos Thermo Scientific, los kits de cuantificación de proteínas SILAC Pierce también permiten el análisis por MS de proteínas de baja abundancia, como proteínas de superficie celular, proteínas específicas de organelas y modificaciones de proteínas postranslacionales, como la fosforilación o la glicosilación.

Recomendada para: Análisis cuantitativo de los cambios relativos en la abundancia de proteínas a partir de diferentes tratamientos celulares; análisis cuantitativo de proteínas para las que no hay anticuerpos disponibles; perfil de expresión de proteínas de células normales frente a células de enfermedades; identificación y cuantificación de cientos a miles de proteínas en un solo experimento

• Eficaz: incorporación del 100 % de las etiquetas en proteínas de células vivas
• Reproducible: elimina la variabilidad intraexperimental causada por la preparación diferencial de muestras
• Flexible: medios líquidos deficientes tanto en L-lisina como en L-arginina, lo que permite una cobertura más completa de los proteomas mediante el etiquetado de dobles aminoácidos isotópicos
• Compatible: etiquetado de proteínas expresado en una amplia variedad de líneas celulares de mamíferos adaptadas para crecer en medio DMEM:F12, incluyendo HeLa, 293T, COS7, U2OS, A549, A431, HepG2, NIH 3T3, Jurkat y otros
• Suplementos de alta calidad: aminoácidos pesados con >99 % de pureza isotópica; FBS dializado probado para garantizar que es estéril, sin endotoxinas y compatible con cultivos celulares