Invitrogen™ Sistema de síntesis de primera cadena SuperScript™ IV

Descripción

Optimizado para la síntesis de ADNc de primera cadena a partir de poli(A)+ purificado o ARN total.

El kit incluye la transcriptasa inversa (RT) SuperScript™ IV, una mutación de MMLV patentada que produce una síntesis de ADNc sólida y fiable en reacciones de RT. El sistema de síntesis SuperScript IV ha mejorado ostensiblemente en comparación con el sistema basado en SuperScript III en resistencia al inhibidor, capacidad de procesamiento y velocidad de reacción, al tiempo que conserva todas las ventajas del sistema anterior, incluido el aumento de la termoestabilidad, la síntesis de ADNc de longitud completa altamente eficaz y la reducción de la actividad de ARNasa. El sistema SuperScript IV está diseñado para proporcionar una síntesis de ADNc fiable, consistente y rápida en presencia de inhibidores que se encuentran en una amplia variedad de muestras que hacen que otros RT actualmente disponibles funcionen de forma ineficiente.

El sistema de síntesis de primera cadena SuperScript IV contiene todos los componentes necesarios para las reacciones de RT, además de un gen de control adicional y cebadores, y proporciona la flexibilidad necesaria para personalizar la preparación de la RT para ajustarse a las necesidades de su aplicación. El sistema de síntesis SuperScript IV es la mejor opción para combinar rendimiento y flexibilidad en aplicaciones de RT-PCR. Se recomienda para todas las aplicaciones de RT-PCR, especialmente cuando la reproducibilidad y fiabilidad es la principal preocupación y cuando los inhibidores de la muestra de ARN pueden interferir con la síntesis de ADNc, lo que provocaría sesgos en los estudios de expresión génica.

Las características de este sistema de síntesis de primera cadena SuperScript IV incluyen:

• Mejora significativa de la resistencia a una gran variedad de inhibidores que pueden interferir con la síntesis de ADNc
• Síntesis de ADNc sólida y específica en una amplia gama de tipos de muestras
• Una reacción más rápida de la transcriptasa inversa que reduce el tiempo de incubación de >50 min a 10 min
• Capacidad de procesamiento significativamente mejor en comparación con la RT SuperScript III

Fuente enzimática
Purificada a partir deE. coli que expresa el gen pol de M-MLV, modificada para aumentar la termoestabilidad y la semivida, la procesividad, la resistencia a los inhibidores y para reducir la actividad de la ARNasa H.

Pruebas de rendimiento y calidad
Ensayos de endodeoxyribonucleasa, exodeoxyribonucleasa y ribonucleasa; y rendimiento y longitud del producto de ADNc.

Definición de la unidad
Una unidad de superíndice IV RT es la cantidad de enzima necesaria para incorporar 1 nmol de desoxirribonucleótido en el material ácido precipitable en 10 min a 37 °C utilizando poli(A) oligo(DT)12-18 como molde/cebador.

Condiciones de reacción unitarias
50 mm Tris-HCl (pH 8,3), 4 mm MgCl2, 10 mm DTT, 50 mm KCl, 0,5 mm dTTP, 0,4 MBq/ml [3H]-dTTP, 0,4 mm poli(A) oligo (DT)12-18 y enzima en 20 μl durante 10 min a 37 °C.