Thermo Scientific™ CpG Methylated Jurkat Genomic DNA

El ADN genómico se aisló de células Jurkat E6.1 (leucemia aguda humana de linfocitos T, clon E6.1) cultivadas hasta confluir en medios RPMI suplementados con suero fetal bovino al 10 %. El ADN genómico aislado fue tratado con CpG metiltransferasa, repurificado y disuelto en tampón TE.≥Nivel de metilación del 98 % de CPG confirmado por secuenciación de bisulfito.

El ADN genómico Jurkat metilado por CPG Thermo Scientific es ADN genómico masculino humano de células Jurkat, enzimáticamente metilado con CPG metiltransferasa (M.SSssI). El ADN genómico se aisló de células Jurkat (leucemia aguda humana de linfocitos T) cultivadas hasta confluir en medios RPMI suplementados con suero fetal bovino al 10 %. El ADN genómico aislado fue tratado con CPG metiltransferasa, repurificado y disuelto en tampón TE. Nivel de metilación del ≥ 98 % de CPG confirmado por secuenciación de bisulfito.

Aspectos destacados

• Puro: ADN sin inhibidores, proteínas ni ARN
• Práctico: concentración de 100 ng/μl lista para usar.
• Compatible: con aplicaciones posteriores
• Completo: metilación de citosinas en dinucleótidos CPG
  Aplicaciones
• Como controles en lo siguiente:
• Secuenciación de bisulfitos
• Análisis combinado de restricción de bisulfitos (COBRA)
• Extensión de primer con un solo nucleótido sensible a la metilación (MS-SNuPE)

Relación A260/230: ≥ 2
Relación A260/280: 1,75 a 1,98
Peligroso: No
Control de calidad:

• La banda predominante de > 30 kb se observa durante la electroforesis en gel de agarosa. La concentración de ADN se determina espectrofotométricamente. La ausencia de nucleasas se confirma mediante pruebas de oligonucleótidos etiquetadas.
• El ADN metilado CpG se protegió de la digestión con la enzima de restricción sensible a la metilación HpaII, determinada por el análisis de qPCR. Después de la qPCR, se observan valores equivalentes de Cq para el ADN digerido y no digerido con HpaII.
• La pureza del ADN se confirma mediante una prueba qPCR funcional en la que los valores de Cq del ADN de la plantilla digerida con MspI y HpaII deben diferir en ≥ 5 ciclos.
• La ausencia de ADN micoplasmático se confirma por PCR.

Como controles en la secuenciación de bisulfitos, análisis combinado de restricción de bisulfitos (COBRA), extensión de primer con un solo nucleótido sensible a metilación (Ms-SNuPE)