Invitrogen™ Kit de clonación de PCR TOPO™ Zero Blunt™, sin células competentes

Descripción

Incluye el vector Zero Blunt TOPO que contiene el gen ccdB para selección positiva, de forma que solo permite el crecimiento de vectores plasmídicos con recombinantes. Resistente a kanamicina (KanR) y Zeocin™ (ZeoR).
Vector pCRBlunt II-TOPO: diseñado para polimerasas de corrección
El vector pCRBlunt II-TOPO está diseñado para clonar productos de PCR con extremo romo generados por polimerasas de corrección termoestables, como la ADN polimerasa Platinum™ Pfx. El vector pCRBlunt II-TOPO contiene lo siguiente:

• Sitios EcoRI que flanquean el sitio de inserción del producto de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para una sencilla escisión de insertos
• Diversas opciones de genes de resistencia a kanamicina y Zeocin en E. coli
• Sitio de primer o promotor SP6 para la transcripción y secuenciación de ARN in vitro
• Sitios de primer directo e inverso M13 para secuenciación o detección de PCR

Selección de clones pCRBlunt II-TOPO
pCR-Blunt II-TOPO permite la selección directa de recombinantes mediante la alteración del gen letal de E. coli, ccdB. El vector contiene el gen ccdB fusionado al extremo C del fragmento LacZα. La ligadura de un producto de PCR con extremo romo altera la expresión de la fusión del gel LacZα-ccdB, lo que solo permite el crecimiento de recombinantes positivos durante la transformación. Las células que contienen un vector no recombinante mueren durante la siembra en placa. Por lo tanto, no se precisa la detección azul/blanco.
Clonación simplificada basada en TOPO
Mediante la tecnología de clonación TOPO, no hay necesidad de emplear primers de PCR que contengan secuencias específicas, procedimientos posteriores a la PCR, preparación de vectores u otros pasos de manipulación de ADN que consumen mucho tiempo. Solo tiene que añadir su reacción de PCR directamente al vector cargado con la topoisomerasa suministrado, incubar 5 minutos y transformar células competentes de E. coli.
Clonación eficiente
Con hasta un 95 % de los clones con el inserto deseado, podrá sondear menor cantidad de clones y ahorrar tiempo y dinero. El vector pCRBlunt II-TOPO utilizado en este kit incluye el gen letal ccdB para permitir una selección eficaz de productos recombinantes de la PCR con extremo romo generados por polimerasas de corrección termoestables.
La referencia en clonación
En el campo de la clonación, la tecnología de clonación TOPO™ ha sido un socio fiable durante más de diez años para miles de científicos. Rápida, fácil de usar y eficiente, la clonación TOPO™ se ha aplicado a muchos vectores distintos para multitud de aplicaciones.
Opciones del kit Zero Blunt TOPO PCR Cloning
El kit Zero Blunt TOPO PCR Cloning para inserción directa de productos de PCR con extremo romo en un vector plasmídico puede adquirirse con diversas células competentes que ofrecen distintas ventajas dependiendo de sus necesidades
Clonación general: Células TOP10 (n.º de cat. K2800-20, K2800-40)
Clonación de alta eficiencia: Células TOP10 Electrocomp™ (n.º de cat. K2860-01, K2860-40)
Clonación general, resistencia T1 bacteriófaga: DH5α-T1R (n.º de cat. K2820-20, K2820-40)
Crecimiento rápido: E. Coli Mach1™-T1R químicamente competente (n.º de cat. K2830-20)
Utilice sus propias células: flexibilidad y ahorro (n.º de cat. 450254)
También ofrecemos una versión del kit que incluye un kit de minipreparación rápida de plásmidos PureLink™ (n.º de cat. K2800-02) para utilizar en el aislamiento de un plásmido recombinante limpio y listo para secuenciación.

• Rápido y fácil: de PCR a clones en solo tres pasos y en tan solo 5 minutos de manipulación
• Eficiente: obtenga hasta el 95 % de clones con el inserto adecuado
• Probado: rendimiento fiable durante más de una década con más de 4000 citas
• Sencillo: no se requieren ligasas, procedimientos posteriores a la PCR ni primers de PCR con secuencias específicas
• Vector: vector pCR™Blunt II-TOPO que contiene el gen ccdB, que permite la selección directa de recombinantes
• Método de clonación: TOPO Cloning: Ligación de 5 minutos basada en la topoisomerasa I de productos de PCR con extremo romo amplificados con polimerasas de corrección termoestables
• Células competentes: Varias opciones: seleccione entre kits con células generales, de alta eficacia, con resistencia T1 bacteriófaga y competentes de rápido crecimiento (disponibles por separado) o utilice las suyas propias
• Resistencia a los antibióticos: Ampicilina (AMPR), Kanamicina (KanR)

Clonación, clonación por PCR