Por qué la filtración de muestras y de la fase móvil es esencial para el análisis de HPLC
¿Filtrar o no filtrar?
Los problemas graves en el análisis de cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) se pueden evitar si se está pendiente de las señales de advertencia preliminares y se realiza el mantenimiento de rutina. La mayoría de las tareas de reemplazo de piezas de HPLC, como cambiar los sellos de las bombas, se reconocen fácilmente como mantenimiento necesario; sin embargo, la filtración de muestras y de la fase móvil también son tareas de mantenimiento muy importantes.
La filtración de muestras y de la fase móvil es una práctica económica y simple que amplían la vida útil de los consumibles en un sistema de HPLC, reduce el desgaste del sistema y preserva su integridad. Al revisar las consecuencias de las prácticas de filtración inadecuadas, los analistas pueden familiarizarse con las señales de advertencia tempranas relacionadas con problemas de filtración, y evitar gastos y tiempo de inactividad asociados a reparaciones de mantenimiento prolongadas y los costes de los reemplazos.
Qué tipo de filtro se debe buscar
La inyección de muestras limpias amplía la vida útil del inyector y de la columna. Mediante filtros de jeringa desechables, se retiran partículas y bacterias de las muestras. Los filtros desechables varían en tamaño (4-25 mm) y tamaño de poro (0,2-1,0 μm). Los filtros de jeringa son membranas cerradas en carcasas de plástico que se adhieren a una jeringa con un conector luer. Las muestras se filtran extrayendo líquido en la jeringa, colocando el filtro y dispensando la muestra a través del filtro en un vial. Para reducir la variabilidad física y química entre los fabricantes, los productos de filtración de muestras y de la fase móvil deben adquirirse al mismo fabricante.
Normalmente se selecciona un filtro de tamaño de poro de 0,45 μm para aplicaciones de HPLC, mientras que para la eliminación de bacterias o aplicaciones de UHPLC se elige un filtro de 0,2 μm. Para muestras cargadas de partículas, Pall incorpora prefiltros de tamaño de poro grande en un dispositivo con membranas de tamaño de poro más pequeño. También hay disponibles filtros estériles y de baja unión a proteíanas. Los inyectores de HPLC se presentan en varios estilos, por ejemplo, un dispositivo de detención de flujo con septum o sin septum y un sistema de válvula manual o automatizado. Un inyector de válvula es el más común. Un inyector debe garantizar una introducción de muestras reproducible.
La filtración de muestras y disolventes evita que los accesorios de los inyectores de bajo volumen se bloqueen, rayen y goteen. El bloqueo del circuito o de la línea de residuos provoca una contrapresión alta y dificulta el llenado del circuito. Los accesorios de bajo volumen muerto, ubicados entre el inyector de la válvula y la columna para disminuir el ensanchamiento de la banda, también están sujetos a bloqueos. Otros factores que contribuyen a los problemas de HPLC incluyen componentes del inyector dañados o no coincidentes, volúmenes de muestra variables, fugas y aumento de la presión del sistema. Con la filtración, los inyectores limpios y correctamente ajustados deberían permitir 5.000 inyecciones.
Para elegir el filtro adecuado es necesario conocer la compatibilidad del filtro/disolvente y las características químicas/físicas del filtro. Estas características abarcan el tamaño de poro, distribución de poro, espesor de filtro, materiales extraíbles, carácter hidrofóbico/hidrofílico, propiedades de unión, pirogenicidad, caudal de gas y líquido, resistencia al estallido, capacidad de uso de autoclave, tamaño de poro y retención nominal de partículas. La elección del filtro incorrecto podría provocar que los materiales extraíbles pongan en peligro los resultados analíticos. Para el análisis cromatográfico, los escenarios resultantes de materiales extraíbles incluyen absorción de muestras, coelución y picos extraños.
Cómo elegir el filtro adecuado
- ¿Su aplicación de filtro es automática o manual?
- ¿Cuál es la compatibilidad química del filtro?
- ¿Cuál es el área de filtración efectiva (EFA) necesaria para la filtración?
- ¿Qué tamaño de poro se debe utilizar para una filtración efectiva?
Resumen
La filtración de muestras y de la fase móvil es una práctica económica y sencilla que puede ampliar la vida útil de los consumibles de HPLC. Con un conocimiento básico de cómo beneficia la filtración adecuada a varios componentes de un sistema de HPLC, y mediante la selección del filtro correcto, los laboratorios pueden evitar el tiempo de inactividad y los gastos de reparación y reemplazo inesperados de piezas.
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