Thermo Scientific™ Pierce™ Coomassie Brilliant Blue Dyes

Descripción

Thermo Scientific Pierce Coomassie Brilliant Blue dyes are composed of one of the most common forms of coomassie dye, which is a key component of various colorimetric protein gel stains. Coomassie R-250 and G-250 dyes are two chemical forms of a disulfonated triphenylmethane compound that is commonly used as the basis of stains for detection of proteins in gel electrophoresis and Bradford-type assay reagents for protein quantitation. The R-250 (red-tinted) form lacks two methyl groups that are present in the G-250 (green-tinted) form, which is also called colloidal coomassie dye.

Los colorantes R-250 y G-250 de Coomassie son dos formas químicas de un compuesto de trifenilmetano disulfonado que se suele utilizar como base de las tinciones para la detección de proteínas en la electroforesis en gel y reactivos de ensayo tipo Bradford para la cuantificación de proteínas. La forma R-250 (teñida de rojo) carece de dos grupos metílicos que están presentes en la forma G-250 (teñida de verde), que también se llama colorante de Coomassie coloidal.

Las tinciones de gel de Coomassie y los reactivos de ensayo de proteínas se suelen formular como soluciones muy ácidas en un 25 a 50 % de metanol. En condiciones ácidas, el colorante se une a las proteínas por lo general a través de aminoácidos básicos (sobre todo arginina, lisina e histidina), y el número de ligandos de colorantes de Coomassie unidos a cada molécula de proteína es aproximadamente proporcional al número de cargas positivas detectadas en la proteína. La unión de proteínas hace que el colorante cambie de marrón rojizo a azul brillante (absorción máxima igual a 595 nm).

Las características incluyen:
• Fácil detección: revela complejos de colores intensos con proteínas
• Alta sensibilidad: puede determinar concentraciones tan bajas como 0,5 µg/cm2 de proteína presente en una matriz de gel
• Tinción reversible: el anión de azul brillante de Coomassie formado en el medio de tinción ácido se combina con los grupos amino protonados de proteínas por la interacción electrostática. El complejo resultante es reversible en las condiciones adecuadas
• Diferenciación entre el colorante fijado y el no fijado: cuando se disuelve en un tampón de citrato de 0,01 m a un pH de 3,0 tiene una absorción máxima a 555 nm. El complejo proteína-colorante se caracteriza por un pico un poco más amplio que el colorante libre con un valor máximo de 549 nm