Thermo Scientific™ Easy-Titer™ Human IgG (gamma chain) Assay Kit

Descripción

Los kits de análisis de anticuerpos Thermo Scientific™ Easy-Titer permiten una determinación exacta de la concentración de anticuerpos en suero y en muestras de sobrenadante de cultivos, e incluye kits específicos para IgG de ratón, IgG de conejo, IgG humana (H+L), IgG humana (Fc) o IgM humana.

Estos kits incluyen microesferas sensibilizadas con anticuerpos que permiten medir la concentración específica de anticuerpos de ratón, conejo y humano mediante una técnica de microaglutinación fácil y rápida que utiliza microplacas estándar y un lector de placas UV-Vis (espectrofotómetro). Cada kit es específico de una especie y clase concreta de inmunoglobulina y, al contrario que los análisis de proteína total, permite medir específicamente la concentración de anticuerpos diana en muestras (p.ej., suero, plasma, sobrenadante de cultivos) que contienen otras proteínas. Los kits son extremadamente sensibles y necesitan volúmenes de muestra muy pequeños. La concentración de anticuerpos viene determinada por la respuesta al análisis (absorbencia) mediante la comparación con una curva estándar preparada a partir de diluciones de una muestra de anticuerpo conocida (vendida por separado).

Características destacadas:

• Kits para los cinco elementos diana más empleados: seleccione un kit específico para la inmunoglobulina de una especie y clase concretas; evite las reacciones cruzadas con otras especies y clases del anticuerpo diana.

• Especificidad basada en anticuerpos: permite medir la concentración de anticuerpos diana en una muestra, no solo la proteína total; además, no es necesario purificar el anticuerpo para evaluar su concentración.

• Más rápido y fácil que el método ELISA: ensayo homogéneo de tres componentes; tiempo de incubación total de 10 minutos.

• No se necesita ningún equipo especial: se emplea un mezclador vórtex estándar, una pipeta, una microplaca de 96 pocillos, un agitador de placas y un lector (la absorbancia debe medirse a 340 nm o 400 nm).

• Sensible: intervalo de ensayo (curva estándar) de 8 a 500 ng/ml; requiere una muestra inicial de al menos 300 ng/ml.

• Reproducible: coeficiente de variación inferior al 5 %; los errores dependerán de la técnica de dilución y pipeteo.

• Estándares de anticuerpos que se venden por separado: utilice cualquier estándar de anticuerpos con la identidad de diana adecuada y una concentración conocida (superior a 1μ0 g/ml).

Los ensayos con anticuerpos Easy-Titer son más rápidos y fáciles que los del método ELISA:

1. Prepare los estándares (de 5 a 500 ng/ml); para ello, diluya un anticuerpo purificado en el tampón de dilución del kit.

2. Prepare las muestras diluyéndolas al menos 20 veces en un tampón de dilución hasta que esté dentro del rango del análisis (de 8 a 500 ng/ml).

3. Agite el vial con gránulos de microesferas para crear una suspensión homogénea.

4. Con una pipeta, añada 20 μl de suspensión de gránulos y 20 μl de cada muestra y estándar en los pocillos de la microplaca de 96 pocillos.

5. Incube la microplaca durante 5 minutos y mezcle enérgicamente.

6. Añada 100 μl de reactivo de bloqueo del kit.

7. Incube la microplaca durante 5 minutos y mezcle enérgicamente.

8. Mida la absorbancia en un lector de placas convencional (340 nm o 405 nm).

9. Represente en una gráfica la curva estándar e interpole el valor de las muestras para determinar su concentración.

Incluye:

Cada kit contiene microesferas sensibilizadas con IgG específica del elemento diana, un tampón de dilución y un tampón de bloqueo.