Thermo Scientific™ Kit de clonación de productos duplicados mediante PCR CloneJET

Descripción

El kit de clonación de productos duplicados mediante PCR CloneJET es un sistema de selección positiva avanzado para la clonación de alta eficiencia de productos de PCR generados con cualquier ADN polimerasa termoestable. Se puede clonar cualquier fragmento de ADN con extremos cohesivos o romos. Es ideal para fragmentos de ADN fosforilados o no fosforilados. La ligadura al vector de selección positiva incluido solo tarda unos 5 minutos y produce más del 99 % de clones recombinantes. Los productos de PCR con extremos romos generados con una enzima de corrección se ligan directamente al vector de clonación.

Los productos de PCR generados con ADN polimerasas que no son de corrección o con mezclas de ADN polimerasas se despuntan antes de la ligadura en cinco minutos con la enzima de conversión en extremos romos de ADN termostable que incluye el kit. Todas las cepas de E. coli comunes de laboratorio se pueden transformar directamente con el producto de ligadura.

Además, es posible clonar otros fragmentos de ADN de extremo romo o adherente. Se trata de un kit idóneo para fragmentos de ADN fosforilados o no fosforilados. La ligadura en el vector de selección positiva incluido se realiza en solo 5 minutos y rinde más de un 99 % de clones recombinantes. Los productos de PCR de extremo romo, generados con enzima de corrección de errores (por ejemplo, polimerasa Pfu) se ligan directamente al vector clonado. Los productos de PCR generados con ADN polimerasas sin actividad de corrección (como polimerasa Taq) o con mezclas de ADN polimerasas se hacen romos antes de la ligadura en 5 minutos con la enzima de procesamiento de extremos romos de ADN termoestable que se suministra con el kit. Todas las cepas de E. coli comunes de laboratorio se pueden transformar directamente con el producto de ligadura.

El kit contiene un novedoso vector de clonación de selección listo para su uso pJET1.2/blunt. El vector contiene un gen enzimas de restricción letal que se interrumpe con la ligadura de un inserto de ADN en el sitio de clonación. Como resultado, solo las células bacterianas con plásmidos recombinantes pueden formar colonias. Las moléculas del vector pJET1.2/blunt recirculadas que no disponen de insertos se expresan mediante una enzima de restricción letal, que mata la célula de E.coli huésped tras la transformación. Esta selección positiva acelera drásticamente el proceso de identificación de colonias y elimina los costes adicionales necesarios para la selección de color azul/blanco. Para una mayor comodidad en el mapeo y manipulación del inserto, el sitio de clonación múltiple del vector de clonación pJET1.2/blunt contiene dos secuencias de reconocimiento BglII que flanquean el sitio de inserción. Además, el vector contiene un promotor T7 para las transcripciones in vitro e in vivo, así como para la secuenciación del inserto.

• Clonación de PCR rápida en solo 5 minutos
• Máxima eficiencia: >99% de clones positivos
• Sin fondo de clonación: vector de selección positiva
• Versátil: idóneo para clonación de extremo romo o adherente
• Económico: evita los costes de detección azul/blanco

Recomendada para:

Clonación de productos de PCR de extremo romo o cola de 3'-dA hasta 10 kb; Clonación de fragmentos de ADN generados con enzimas de restricción; Secuenciación de ADN clonado; Transcripción in vitro e in vivo de insertos clonados del promotor T7

Nota:

Antes de la electroporación es preciso purificar siempre en columna la mezcla de ligadura, por ejemplo con el kit de purificación de PCR GeneJET, †K0701, o bien someterla al kit de extracción con cloroformo. La electroporación se inhibe por la presencia de proteínas y sales en la mezcla.