Invitrogen™ SuperScript™ III CellsDirect™ cDNA Synthesis Kit

Descripción

El kit de síntesis de ADNc SuperScript III CellsDirect está optimizado para sintetizar la primera cadena de ADNc directamente desde un lisado de células de mamíferos sin aislar primero el ARN. La lisis y la transcripción inversa se realizan en el mismo tubo, y el ADNc de primera cadena resultante está listo para usarse en la clonación y PCR. Para la RT-PCR cuantitativa en tiempo real, véase la nota siguiente.

• Compatible con una amplia gama de tipos de células de mamíferos cultivados bajo diferentes condiciones de tratamiento
• El formato de un solo tubo minimiza la pérdida de reactivos, la pérdida de muestras y el tiempo de manipulación
• El volumen total de lisado se utiliza en la reacción de síntesis de la primera cadena del ADNc, proporcionando mayores rendimientos con un número limitado de células y permitiendo la detección de transcripciones raras
• La transcriptasa inversa SuperScript III, con actividad reducida de ARNasa H y mayor estabilidad térmica, produce altos rendimientos de ADNc en la reacción de síntesis de primera cadena, para una mayor sensibilidad y una detección mejorada de transcripciones raras
• Genera ADNc de alta calidad para su uso en una variedad de aplicaciones, incluyendo clonación y PCR
• El protocolo simple tarda menos de 2 horas

Cómo funciona En la RT-PCR tradicional, el ARN se aísla primero de las células en un procedimiento que requiere mucho tiempo y puede dar lugar a una pérdida de material. Mediante el sistema de síntesis de ADNc SuperScript III CellsDirect, las células se lisan y el ADNc se genera a partir del lisado en un único tubo con un manejo mínimo y sin pérdida de muestra. La ADNasa I se añade para eliminar el ADN genómico antes de la síntesis de primera cadena. Este kit se ha optimizado para muestras de células pequeñas, que van desde 10.000 células hasta una sola célula (medida por dilución en serie). El uso de la transcriptasa inversa SuperScript III asegura alta especificidad y altos rendimientos de ADNc a partir de pequeñas cantidades de material inicial, únicamente 10 pg de ARN total. Después de la síntesis, la primera cadena de ADNc se puede amplificar con cebadores específicos mediante PCR sin extracciones orgánicas intermedias ni precipitaciones de etanol. Temperatura óptima de reacción: 50 °C.

Para la RT-PCR cuantitativa en tiempo real (qRT-PCR) a partir de lisado celular, se recomiendan los productos Cells-to-CT para la extracción de ARN. Estos kits incluyen reactivos y protocolos que se han optimizado específicamente para qRT-PCR en tiempo real.

PCR y PCR en tiempo real, transcripción inversa, síntesis de ADNc directo de células