Thermo Scientific™ Eco31I (BsaI) (10 U/μl)

Descripción

ADN lambda (dcm-) digerido con Eco31I (BSAI), agarosa al 0,7 %, 2 sitios de escisión

Las endonucleasas de restricción convencionales representan una gran colección de enzimas de restricción de alta calidad, optimizadas para funcionar en uno de los tampones del sistema de cinco tampones. Además, se proporciona el tampón universal Tango para mayor comodidad en digestiones dobles. Todas las enzimas muestran una actividad del 100 % en las condiciones de reacción y tampón recomendadas. Para garantizar uniformidad en el rendimiento, los tampones de enzimas de restricción Thermo Scientific contienen BSA previamente mezclada, lo que mejora la estabilidad de numerosas enzimas y fija sustancias contaminantes que pueden estar presentes en preparaciones de ADN.

5'...G G T C T C (N)₁▵...3'

3'...C C A G A G (N)₅▵...5'

Condiciones para una actividad del 100 %:

• 1 tampón G: 10 mm de Tris-HCl (pH 7,5 a 37 °C), 10 mm de MgCl₂, 50 mm NaCl y 0,1 mg/ml de BSA
• Incubar a 37 °C.

Tampón de almacenamiento:

• Eco31I se suministra en: 10 mm de Tris-HCl (pH de 7,5 a 25 °C), 200 mm de KCl, 1 mm de DTT, 0,1 mm de EDTA, 0,2 mg/ml de BSA y 50 % (v/v) de glicerol

Ligadura y refragmentación:

• Tras una sobredigestión con 50 veces la cantidad recomendada de Eco31I, más del 95 % de los fragmentos de ADN pueden ligarse y recortarse

Efectos de metilación:

• Dam: nunca se solapa, sin efecto.
• Dcm: puede solaparse, reducción de fragmentación.
• CpG: puede solaparse, reducción de fragmentación.
• EcoKI: nunca se solapa, sin efecto.
• EcoBI: puede solaparse, efecto sin determinar.

Digestión del ADN integrado en agarosa:

• Se requieren como mínimo 5 u de la enzima para la digestión completa de 1 μg de ADN lambda integrado en agarosa en 16 horas

Nota:

Analizado mediante ADN de lambda (dcm-) (SD0021), ya que uno de los dos sitios de reconocimiento Eco31I en el ADN lambda es difícil de escindir. La fragmentación con Eco31I se reduce debido a la metilación de dcm solapante. Para evitar la metilación dcm, utilice una cepa con dam, dcm-, como GM2163 (M0099). La concentración baja de sales, la concentración alta de glicerol (> 5 %), un pH >8 o un gran exceso de la enzima pueden producir actividad estrella (star activity). La Eco31I se disocia tras reconocer su sitio y puede generar cualquier extremo 5' de base 4 deseado. Esta función es útil para la clonación directa de productos de PCR.