Thermo Scientific™ Mezcla de proteasas tripsina/Lys-C Pierce™, grado MS

Descripción

La caracterización, identificación y cuantificación de proteínas mediante la MS comienza con una digestión de proteínas eficaz y reproducible. Las proteasas específicas de la secuencia se utilizan para escindir proteínas en péptidos o fragmentos más pequeños. La tripsina es la proteasa preferida para la digestión de proteínas. Sin embargo, la digestión por separado o secuencial con proteasas alternativas puede mejorar la cobertura de secuencia de proteínas individuales o generar secuencias de péptidos únicas para diferentes aplicaciones de MS.

La proteasa Lys-C Thermo Scientific™ Pierce™ de grado MS es una endoproteinasa nativa altamente purificada validada para la máxima actividad y estabilidad en aplicaciones de proteómica.

Características de la proteasa Lys-C de grado MS:
• Digestión mejorada: uso en tándem con tripsina para reducir las escisiones trípticas no detectadas
• Aumento de la cobertura de secuencia: se consigue una mejor caracterización de proteínas gracias a los péptidos superpuestos con propiedades de fragmentación e ionización cromatográfica complementaria.
• Versatilidad: actividad eficaz de la encima en condiciones de alta desnaturalización (p. ej., 8M de urea).
• Especificidad para escisión de lisina C-terminal: al menos un 90 % para una muestra de proteína compleja.
• Estabilidad: se proporciona en un formato liofilizado

Detalles del producto
Se trata de una proteasa serina de uso en espectrometría de masas (MS) aislada de los enzimogenes de Lysobacter. La proteasa Lys-C tiene una alta actividad y especificidad para residuos de lisina en péptidos de mayor tamaño y menos complejidad de muestra que la tripsina (es decir, menos péptidos). A diferencia de la tripsina, la proteasa Lys-C puede disociar lisinas seguidas por prolinas, lo que hace que sea ideal para la digestión secuencial de proteínas seguida de tripsina para disminuir las escisiones no detectadas. Estas propiedades exclusivas de la proteasa Lys-C garantizan una gran eficacia de digestión cuando se usa sola o seguida de digestión propiedades asegurar la gran eficacia de digestión tríptica. Además, los péptidos prototípicos de Lys-C suelen tener estados de carga superior, lo que la convierte en una enzima ideal para usar en la fragmentación de ETD.

La proteasa Lys-C se usa frecuentemente en los flujos de trabajo de enriquecimiento de fosfopéptidos debido a que genera péptidos con aminas primarias tanto en el terminal N como en el C, lo que permite etiquetar doblemente los fragmentos con etiquetas isobáricas con reactivos de aminas. Esto se traduce en una mejora de la ionización del péptido y de los límites de cuantificación, ya que se pueden volver a aislar más fragmentos de iones durante la adquisición de MS3. Esta enzima puede usarse en flujos de trabajo de digestión tanto en solución como en gel para producir péptidos para la identificación de proteínas LC-MS/MS. Esta enzima Lys-C se envasa liofilizada (en cantidades de 20 µg o 100 µg).

La endoproteinasa Lys-C hidroliza específicamente las proteínas en el lado carboxilo de la lisina. La digestión eficaz de las proteínas se puede completar en 2 horas a 37 °C. La proteasa Lys-C permanece activa en condiciones de alta desnaturalización como 8 M de urea, 2 M de guanidina-HCl, un 1 % de SDS, un 2 % de CHAPS y un 40 % de acetonitrilo, y funciona bien en un pH 7–9 (actividad máxima a pH 8). Esta enzima liofilizada tiene una masa de 30 kDa y permanece estable durante 1 año cuando se almacena a - 20 °C.

Aplicaciones
• Cobertura de secuencia mejorada de digestión de proteínas
• Secuenciación de novo
• Estudios epigenéticos
• Digestión de proteínas en gel y en solución