ADN lambda digerido con SalI, agarosa al 0,7 %, 2 sitios de escisión
Las endonucleasas de restricción convencionales representan una gran colección de enzimas de restricción de alta calidad, optimizadas para funcionar en uno de los tampones del sistema de cinco tampones. Además, se proporciona el tampón universal Tango para mayor comodidad en digestiones dobles. Todas las enzimas muestran una actividad del 100 % en las condiciones de reacción y tampón recomendadas. Para garantizar uniformidad en el rendimiento, los tampones de enzimas de restricción Thermo Scientific contienen BSA previamente mezclada, lo que mejora la estabilidad de numerosas enzimas y fija sustancias contaminantes que pueden estar presentes en preparaciones de ADN.
5'...G▵T C G A C...3'
3'...C A G C T▵G...5'
Condiciones para una actividad del 100 %
1 tampón O: 50 mm de Tris-HCl (pH 7,5 a 37 °C), 10 mm de MgCl2, 100 mm de NaCl y 0,1 mg/ml de BSA
Incubar a 37 °C.
Tampón de almacenamiento
Sall se suministra en: 10 mm de Tris-HCl (pH 7,4 a 25 °C), 100 mm de KCl, 1 mm de DTT, 0,1 mm de EDTA, 0,2 mg/ml de BSA y 50 % (v/v) de glicerol
Ligadura y refragmentación
Tras una sobredigestión con una cantidad 50 veces mayor a la recomendada de SalI, más del 95 % de los fragmentos de ADN pueden ligarse y recortarse
Efectos de metilación
Dam: nunca se solapa, sin efecto.
Dcm: nunca se solapa, sin efecto.
CpG: se solapa completamente, bloqueada.
EcoKI: nunca se solapa, sin efecto.
EcoBI: nunca se solapa, sin efecto.
Digestión de ADN integrado en agarosa
Se requieren como mínimo 5 unidades de la enzima para la digestión completa de 1 μg de ADN lambda integrado en agarosa en 16 horas
Extremos compatibles
Eco88I, SmoI, XhoI
Nota:
La concentración baja de sales, la concentración alta de glicerol (> 5 %), un pH >8 o un gran exceso de la enzima pueden producir actividad estrella (star activity). Las formas súperhelicoidales de pBR322 y pUC necesitan una sobredigestión con 10 veces la cantidad recomendada de SalI para conseguir una digestión completa. Con la incubación a 25 °C se obtiene una actividad del 50 al 75 %.
Es sensible a la metilación CpG, no es sensible a la metilación dam, no es sensible a la metilación dcm, no es sensible a la metilación dam, no es sensible a la metilación dcm
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